一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠肺泡巨噬细胞NR8383

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

传代方法：首次传代建议1:2，传代周期为2天换液。

二、细胞收到后的处理

接收细胞后，应培养至良好状态，灌满完全培养液并封好瓶口，以确保细胞在运输过程中的稳定性。收到细胞后，使用75%酒精对细胞瓶进行消毒，在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态。观察细胞生长情况，进行显微镜拍照保存，建议在40x、100x、200x上各拍摄一张，前三天的照片为重要的售后依据。若不提供照片，默认接收状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如未超过80%汇合度，将培养液收集并留5ml，用于培养；若超过80%，进行以下传代：

贴壁细胞传代：1. 废弃培养上清，用不含钙、镁离子的PBS清洗1-2次；2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，37℃培养1-2分钟，观察细胞变化；3. 细胞脱落后添加5ml完全培养基终止消化，将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃上清后重悬；4. 按1:2比例分瓶传代，补充新完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2培养箱中。

悬浮细胞传代：方法一：收集细胞，1000RPM离心8-10分钟，弃上清后补加1-2ml培养基，分瓶；方法二：半数换液，弃去一半培养基，悬起剩余细胞，按1:2比例分瓶。

b. 细胞冻存

生长至80%汇合度时，清洗细胞后使用消化液消化，终止反应后转移至离心管中，1000RPM离心5分钟，弃上清后与无血清冻存液（货号：C7001）混匀，放入冻存管中。将冻存管放置于-80℃冰箱中，若需转入液氮，需在-80℃保存24小时后再进行转接。

c. 细胞复苏

从液氮中取出冻存管，迅速放入37℃水浴中解冻，擦拭外壁后将细胞移至含5ml完全培养基的离心管中，1000RPM离心5分钟。弃上清后重悬，接种至T25培养瓶中，放入37℃、5% CO2培养箱，次日更换新鲜培养基继续培养。

四、注意事项

运输过程中可能出现细胞脱落，若问题严重，可将所有培养液收集至离心管中，离心后如有必要可进行重悬和传代操作，确保细胞成长状态得以维持。

五、售后条款

如细胞出现问题，尊龙凯时将根据具体情况重发或不重发。重发的情况包括运输中遭遇问题、污染等，而因客户不当操作或选择不推荐的培养体系导致的问题则不予重发。客户需要在收到产品后及时反馈，确保合理的售后保障。