近期,农业农村部发布了5项与奶业相关的标准,其中包括NY/T4630—2025《牛乳及其制品中α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的测定 高效液相色谱法》。该标准自2025年5月1日起正式实施。随着生活水平的提高,奶制品在中国的消费量迅猛增长。然而,婴幼儿中牛乳蛋白过敏症(Cow's Milk Allergy, CMA)的发病情况也在逐年增加,尤其是对β-乳球蛋白和α-乳白蛋白的过敏反应。因此,建立高特异性、高灵敏度且快速准确的检测方法,对于保护CMA患儿的健康至关重要。
在此背景下,我们参照上述标准,采用高性能尺寸排阻色谱柱TSKgel UP-SW3000(46mm ID × 30cm, 2μm)建立了牛乳及其制品中β-乳球蛋白和α-乳白蛋白的检测方法。样品处理方面,我们对高温杀菌牛乳和灭菌牛乳进行了平行实验。取样125g(精确至0.1mg),加入10mL水混合,利用盐酸溶液调节pH至4.60±0.05,然后转移至25mL容量瓶中加水定容并混匀。之后,将样品转移至离心管中静置2小时后,以12000 rpm离心10分钟。接着,准确移取上清液1mL至5mL容量瓶,添加盐酸胍缓冲溶液3mL及50µLβ-巯基乙醇,再用盐酸胍缓冲溶液定容,混匀后室温静置2小时,摇匀后经过过滤以得到待测样品溶液。
在实验条件方面,本研究使用的色谱柱为TSKgel UP-SW3000,流动相为盐酸胍缓冲溶液,流速为0.18 mL/min,检测波长为UV 280nm,进样量为10µL。根据检测结果,将β-乳球蛋白和α-乳白蛋白的浓度作为横坐标,色谱峰面积作为纵坐标,绘制得到了标准曲线,其相关系数均大于0.99,显示出方法的高度准确性和灵敏度。
总结来说,通过使用TSKgel UP-SW3000色谱柱,我们成功建立了牛乳及其制品中β-乳球蛋白和α-乳白蛋白的检测方法,峰分离度大于15。这一方法的优势在于省时且具备高检测灵敏度,因此在生物医疗领域的应用前景广阔。尊龙凯时致力于为广大消费者提供安全高质量的产品,持续关注CMA等公共健康问题。