一、细胞培养条件

细胞名称：人前列腺癌细胞VCAP

生长特性：贴壁

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：DMEM（含NaHCO₃ 15g/L）+ 10% FBS + 1% P/S

传代方法：首次建议1:2传代；如发现传代情况良好，应在2天后更换培养基。

备注：用无菌离心管收集培养基，建议对比使用我们提供的完全培养基。

二、细胞收到后处理

收到细胞后，将其培养至理想状态，灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方法。在操作时，使用75%酒精对整个细胞瓶进行喷洒消毒，随后放置于超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO₂的培养箱中静置3-4小时，以便稳定细胞状态；此后可进行处理。使用显微镜观察细胞的生长情况并拍照记录（最好在40x, 100x, 200x倍下各拍一张），前三天的照片为售后依据，若不提供照片则默认为收到状态良好。

在传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另外一瓶使用自配的完全培养基，以便进行对比培养，更换培养基后将瓶盖稍微松动。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞未超过80%汇合度，收集完全培养液至离心管中，保留5ml完全培养基，放入37℃、5% CO₂孵箱继续培养。如果细胞密度超过80%，请遵循以下传代步骤：

弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
向培养瓶中添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，显微镜下观察细胞脱落情况。一旦大部分细胞变圆并脱落，迅速取回操作台，轻轻晃动培养瓶，随后加入超过5ml的完全培养基以终止消化。
轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，转移悬液至15ml离心管中，在1000 RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，并补加1-2ml完全培养基进行重悬。
按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），添加新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO₂的细胞培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

当细胞生长至覆盖T25培养瓶的80%面积时，首先弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察至细胞回缩后，加入5ml完全培养液以终止消化。轻轻吹打细胞使其脱落，随后转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
弃去上清，保留细胞沉淀并加入1ml的无血清冻存液（如雅吉生物货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
将冻存细胞直接放入-80℃冰箱。如需将细胞转入液氮罐，需先在-80℃冰箱中存放24小时以上。

c. 细胞复苏

从液氮中取出冻存管（请佩戴防护面具），迅速置入37℃水浴中解冻，直至冻存管内无结晶，随后用75%的酒精擦拭冻存管外壁。
将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
弃去上清，沉淀重悬于5ml完全培养基中，再接种至T25培养瓶，放置于37℃、5% CO₂的细胞培养箱中继续培养。
翌日更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

某些细胞可能在运输中因贴壁不牢而发生脱落，属于正常现象。如脱落较多，建议将培养瓶内所有培养液收集至离心管，离心后使用上清进行过渡培养。沉淀部分可加入胰酶进行消化处理，复悬后的细胞可再次进行1:2比例的分瓶传代。

五、售后条款

1）细胞出现问题，可重发的情况有哪些？

运输途中遭遇的各种问题（如细胞丢失、瓶身破损、培养液泄漏等）可申请重发。
如在收到产品后48小时内反馈的细胞污染问题，提供有效的实验结果后可重发。
常温发货的细胞静置24小时后或干冰发货的细胞复苏后24小时内，大部分细胞未存活（需提供清晰的细胞状态照片）可重发。
如收到后48小时内细胞污染，可申请重发。
细胞活性问题应在收到产品7天内报告，使用台盼蓝染色法验证细胞活力，确认后可重发。

如前三天有照片记录且细胞出现问题时需提供详尽操作步骤，将问题反馈给技术人员，由其判定责任后进行重发。

2）细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？

由客户造成的细胞污染，不重发。
客户操作不当导致细胞状态不佳，不重发。
非推荐的细胞培养体系致使细胞状态不佳，不重发。
未提供细胞培养前3天的照片，不重发。
细胞培养时经其它处理的，不重发。
细胞收到2天内未告知问题的，不重发。
其他具体情况需视具体问题而定。

以上是关于尊龙凯时人前列腺癌细胞VCAP培养的相关说明，请遵照执行，以确保您的实验成功与细胞健康。